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了解一下中性蛋白酶的一般性質(zhì)有哪些吧

更新時間:2021-10-12  |  點擊率:2290
  大多數(shù)中性蛋白酶是含鋅離子的金屬酶,相對分子質(zhì)量為35000~40000,等電點為pH值8~9。是微生物蛋白酶中最不穩(wěn)定的酶,很易自溶,即使在低溫冰凍干燥,也會造成相對分子質(zhì)量的明顯減少。
 
  (一)一般性質(zhì)
 
  大多數(shù)微生物中性蛋白酶是金屬酶,一分子酶蛋白中含一原子鋅,分子質(zhì)量35 000-40 000,等電點pH8~9,是微生物蛋白酶中最不穩(wěn)定的酶,很易自溶,即使在低溫冰凍干燥,也會造成分子質(zhì)量的明顯減少。
 
  代表性的中性蛋白酶是耐熱解蛋白芽孢桿菌所產(chǎn)生的熱解素與枯草桿菌的中性蛋白酶,這些酶在pH6~7穩(wěn)定,超出此范圍迅速失活。以酪蛋白為底物時,枯草桿菌蛋白酶最適pH為7~8,熱解素是7~9,曲霉菌的酶是pH 6.5~7.5。
 
  一般中性蛋白酶的熱穩(wěn)定性較差,枯草桿菌中性蛋白酶在pH7,60*(2處理15min,失活90%;棲土曲霉3.942中性蛋白酶55℃處理10min,失活80%以上;而放線菌166中性蛋白酶的熱穩(wěn)定性更差,只在35℃以下穩(wěn)定,45。
 
  C迅速失活。只有少數(shù)例外,如熱解素在80℃處理1h,尚存酶活50%;有的枯草桿菌中性蛋白酶,在pH7,65℃酶活幾乎無損失。酶的最適溫度,取決于反應(yīng)時間,在反應(yīng)時間lo~30rain內(nèi),最適溫度是45~50℃。鈣離子可以增加酶的穩(wěn)定性,并減少自溶。
 
  (二)活性中心
 
  酶的活性中心的鋅離子,起著酶同底物之間的橋梁作用。
 
  有些酶的分子中尚含若干原子鈣(表5—16)。鈣具有穩(wěn)定構(gòu)象的作用,還同酶的耐拭杜右擎若活性中心的鋅用EDTA去除后,用其他金屬置換,由不同金屬可得到活性不同的酶。
 
  借助此法可改進蛋白酶的活性以制備高活性蛋白酶結(jié)晶,據(jù)認為高活性型的酶其活性中心含有鈣、鈷、銅、錳、鎳和鋅原子,如用鋇、鎘、鐵、鈉、鉛置換,則得到的蛋白酶無活性,結(jié)晶的鈣型酶,酶活性比普通的結(jié)晶高3倍以上。
 
  以錳代替多黏芽孢桿菌中性蛋白酶活性中心的鋅,酶活提高56%,并提高了耐熱性。不少中性蛋白酶的氨基酸組成已經(jīng)測定。
 
  芽孢桿菌中性蛋白酶中,均不含半胱氨酸所構(gòu)成的二硫鍵,有的還不含甲硫氨酸。對于氨基酸的順序尚不清楚??莶輻U菌中性蛋白酶,酶分子中的2~3個酪氨酸和1個組氨酸殘基同鋅原子一起是表現(xiàn)酶的活性所不可少的,而一個色氨酸和幾個鈣原子在維持酶的構(gòu)象上有重要作用。
 
  短小芽孢桿菌中性蛋白酶,酶活性的表現(xiàn)除需要鋅外,尚需絲氨酸殘基。耐熱性的中性蛋白酶熱解素與枯草桿菌中性蛋白酶A,其活性中心氨基酸是一致的。
 
  (三)專一性
 
  中性蛋白酶的最小合成底物是Z—Gty—X—NH:,其中的X須是疏水性大分子氨基酸,若切開點肽鍵的羧基是由丙氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或組氨酸殘基所提供,則水解力增強。中性蛋白酶對于堿性蛋白酶的合成底物幾乎*沒有作用。
 
  不少芽孢桿菌也生產(chǎn)堿性蛋白酶。可利用羥基磷灰石吸附中性蛋白酶,而同堿性蛋白酶分開。由于中性蛋白酶優(yōu)先切開亮氨酸或苯丙氨酸構(gòu)成的肽鍵,因此可以用呋喃基丙烯酰甘氨基乙酰亮氨酸酰胺(FAGLA,F(xiàn)uryl acryloyl glycyl leucine amide)為底物,用分光光度法作精確的測定。

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