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蛋白電泳(PAGE)

更新時(shí)間:2010-02-27  |  點(diǎn)擊率:2905

蛋白電泳(PAGE)

聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺和交聯(lián)劑N,N-甲叉雙丙烯酰胺在加速劑N,N,N,N—四甲基乙二胺(簡(jiǎn)稱TEMED)和催化劑過(guò)硫
酸銨(簡(jiǎn)稱AP)或核黃素(即vitamin B2)的作用下聚合交聯(lián)成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠,以此凝膠為支持物的電泳稱為聚丙烯酰胺凝膠電泳
(polyacrylamide gel electrophoresis,簡(jiǎn)稱PAGE)
S DS-PAGE是在要電泳的樣品中加入含有SDS和β-巰基乙醇(或者DTT)的樣品處理液,SDS可以斷開分子內(nèi)和分子間的氫鍵,破壞
蛋白質(zhì)分子的二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu),β-巰基乙醇可以斷開半胱氨酸殘基之間的二硫鍵,破壞蛋白質(zhì)的四級(jí)結(jié)構(gòu)。SDS還與蛋白質(zhì)結(jié)合使蛋白
質(zhì)-SDS復(fù)合物上帶有大量的負(fù)電荷,這時(shí)各種蛋白質(zhì)分子本身的電荷*被SDS掩蓋。這樣電泳時(shí),就消除了各種蛋白質(zhì)本身電荷及結(jié)
構(gòu)上的差異,電泳速度只是與蛋白質(zhì)分子量有關(guān)。用本法測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量只需根據(jù)待測(cè)蛋白質(zhì)在已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)圖中的位
置,就能得知分子量.

聯(lián)