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深低溫保藏細(xì)胞的解凍

更新時(shí)間:2010-01-18  |  點(diǎn)擊率:3037

深低溫保藏細(xì)胞的解凍
深低溫保藏的細(xì)胞十分脆弱,要輕柔操作??焖俳鈨錾畹蜏乇2?br />的細(xì)胞,然后直接將其接種到*生長(zhǎng)培養(yǎng)基中,如果細(xì)胞對(duì)抗
凍劑(DMSO或甘油)特別敏感,則離心除去抗凍劑,然后將細(xì)胞
接種到*生長(zhǎng)培養(yǎng)基中。下面是深低溫保藏細(xì)胞的建議解凍步
驟:
直接接種法
1.從凍存管中取出細(xì)胞,用37℃水浴快速解凍。
2.將細(xì)胞直接接種到*生長(zhǎng)培養(yǎng)基中。每毫升凍存細(xì)胞需要 
 10-20ml*生長(zhǎng)培養(yǎng)基。計(jì)算活細(xì)胞的個(gè)數(shù)。細(xì)胞接種量至
 少要達(dá)到3X105 活細(xì)胞/ml。
3.將細(xì)胞培養(yǎng)12-24h。更換新鮮*生長(zhǎng)培養(yǎng)基以去除抗凍劑。
離心法
1.從凍存管中取出細(xì)胞,用37℃水浴快速解凍。
2.將1-2ml 凍存細(xì)胞接種到大約25ml*生長(zhǎng)培養(yǎng)基中。要非常
輕柔地進(jìn)行混合。
3.用大約80 X g的速度離心2-3分鐘。
4.吸除上清液。
5.用*生長(zhǎng)培養(yǎng)基輕輕重懸解離下來(lái)的細(xì)胞,并計(jì)算活細(xì)胞的
個(gè)數(shù)。
6.接種細(xì)胞。細(xì)胞接種量至少要達(dá)到3X105 活細(xì)胞/ml。

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