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NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)試劑盒 說明 技術(shù)文章

更新時(shí)間:2019-06-10  |  點(diǎn)擊率:1823

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NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)試劑盒

商品貨號(hào):QS1003
英文名稱:NADP-Malate Dehydrogenase(NAD-MDH)Assay Kit
別名:NADP-蘋果酸脫氫酶試劑盒 NADP-MDH Kit NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)試劑盒 NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)測(cè)試盒
檢測(cè)方法:常量法

 

商品貨號(hào):商品品牌:規(guī)格基本售價(jià)選擇規(guī)格
QS1003-50管/48樣 50管/48樣¥320.00元 

 

產(chǎn)品詳細(xì)介紹

 

測(cè)定意義:

MDH (EC 1.1.1.37)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,線粒體中MDH是TCA循環(huán)的關(guān)鍵酶之一,催化蘋果酸形成草酰乙酸;相反,胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物, 連接多條重要的代謝途徑。因此,MDH在細(xì)胞多種生理活動(dòng)中扮演著重要的角色,包括線粒體的能量代謝、 蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等。根據(jù)不同的輔酶特異性,MDH分為NAD-依賴的MDH和NADP-依賴的MDH, NADP-MDH主要存在于真核細(xì)胞中。

測(cè)定原理:

NADP-MDH催化NADPH還原草酰乙酸生成蘋果酸,導(dǎo)致340nm處光吸收下降。

 

 

產(chǎn)品說明書

貨號(hào): QS1003                規(guī)格:50 管/48 樣

 

  NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)試劑盒說明書 紫外分光光度法

 

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義:

MDH (EC 1.1.1.37)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,線粒體中 MDH 是 TCA 循環(huán)的關(guān)鍵酶之一,催化蘋果酸形成草酰乙酸;相反,胞漿中 MDH 催化草酰乙酸形成蘋果酸。 草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物, 連接多條重要的代謝途徑。因此,MDH 在細(xì)胞多種生理活動(dòng)中 扮演著重要的角色,包括線粒體的能量代謝、 蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病 性等。根據(jù)不同的輔酶特異性,MDH 分為 NAD-依賴的 MDH 和 NADP-依賴的 MDH, NADP-MDH 主 要存在于真核細(xì)胞中。

測(cè)定原理:

NADP-MDH 催化 NADPH 還原草酰乙酸生成蘋果酸,導(dǎo)致 340nm 處光吸收下降。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:

紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1 mL 石英比色皿和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

試劑一: 提取液 60 mL×1 瓶,在 4℃保存;

試劑二: 液體 50 mL×1 瓶,在 4℃保存;

試劑三: 粉劑×2 支,-20℃保存;臨用前加入 300μ L 蒸餾水;用不完的試劑分裝后-20℃ 保存,禁止反復(fù)凍融。

試劑四: 粉劑×2 支,-20℃保存;臨用前加入 300μ L 蒸餾水;用不完的試劑分裝后-20℃ 保存,禁止反復(fù)凍融。

樣本測(cè)定的準(zhǔn)備:

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備:

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:

先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104 個(gè)):試劑一體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 試劑一),超 聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);8000g 4℃ 離心 10min,取上清置冰上待測(cè)。

組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織, 加入 1mL 試劑一),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

2、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。

測(cè)定步驟:

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm,蒸餾水調(diào)零。

2、將試劑二在 37℃(哺乳動(dòng)物)或 25℃(其它物種)水浴 10min 以上。

3、操作表:

試劑名稱(μ L)測(cè)定孔
樣本 20
試劑二760
試劑三10
試劑四10

將上述試劑按順序加入 1 mL 石英比色皿中,混勻后立即在 340 nm 波長(zhǎng)下記錄初始吸光度 A1 和反應(yīng) 1min 后的吸光度 A2,計(jì)算 Δ A=A1-A2。

注意:若 A1-A2 大于 0.5,需將樣本用提取液稀釋,使 A1-A2 小于 0.5,可提高檢測(cè)靈敏度。 計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

NADP-MDH 活力單位的計(jì)算:

1、血清(漿)NADP-MDH 活力的計(jì)算

單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗 1 nmol 的 NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。

NADP-MDH(nmol/min/mL)=[ΔA×V 反總÷(ε ×d)×109 ]÷V 樣÷T=6430×ΔA

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 NADP-MDH 活力的計(jì)算:

(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。

NADP-MDH ( nmol/min/mg prot ) =[ΔA×V 反 總 ÷ ( ε ×d ) ×109 ]÷(V 樣 ×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

(2)按樣本鮮重計(jì)算:

單位的定義:每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。

NADP-MDH(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε ×d)×109 ]÷(W ×V 樣÷V 樣總)÷T =6430×ΔA÷W

(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位的定義:每 1 萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。

NADP-MDH(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反總÷(ε ×d)×109 ]÷(V 樣÷V 樣總×500) ÷T=12.86×ΔA

V 反總:反應(yīng)體系總體積,8×10-4 L;ε:NADPH 摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d: 比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.02 mL;V 樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng) 時(shí)間,1 min;W:樣本質(zhì)量,g;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500 萬。

 

 

系列產(chǎn)品及單價(jià)

輔酶Ⅰ系列    
QS1000輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒可見分光光度法50管/24樣500
MS1000輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒微量法100管/48樣920
QS1001乳酸脫氫酶(LDH)測(cè)試盒可見分光光度法50管/24樣170
MS1001乳酸脫氫酶(LDH)測(cè)試盒微量法100管/48樣330
QS1002NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)測(cè)試盒紫外分光光度法50管/48樣280
MS1002NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)測(cè)試盒微量法100管/96樣550
QS1003NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)測(cè)試盒紫外分光光度法50管/48樣320
MS1003NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)測(cè)試盒微量法100管/96樣600
QS1004NADH氧化酶(NOX)測(cè)試盒  可見分光光度法50管/48樣450
MS1004NADH氧化酶(NOX)測(cè)試盒  微量法100管/96樣850
QS1005-50檸檬酸合酶(CS)測(cè)試盒可見分光光度法50管/48樣3200
QS1005-25檸檬酸合酶(CS)測(cè)試盒可見分光光度法25管/24樣2000
MS1005檸檬酸合酶(CS)測(cè)試盒微量法100管/48樣3500
QS1006丙酮酸脫羧酶(PDC)測(cè)試盒紫外分光光度法50管/48樣720
MS1006丙酮酸脫羧酶(PDC)測(cè)試盒微量法100管/96樣1400
QS1007醇脫氫酶(ADH)測(cè)試盒紫外分光光度法50管/48樣280
MS1007醇脫氫酶(ADH)測(cè)試盒微量法100管/96樣550
QS1008單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測(cè)試盒紫外分光光度法50管/48樣800
MS1008單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測(cè)試盒微量法100管/96樣1550
QS1009乙醛脫氫酶(ALDH)測(cè)試盒紫外分光光度法50管/48樣420
MS1009乙醛脫氫酶(ALDH)測(cè)試盒微量法100管/96樣800
QS1010NAD激酶(NADK)測(cè)試盒可見分光光度法50管/48樣600
MS1010NAD激酶(NADK)測(cè)試盒微量法100管/48樣1100
QS1011線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測(cè)試盒   紫外分光光度法25管/24樣1280
MS1011線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測(cè)試盒   微量法100管/96樣2500
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