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非蛋白巰基測定試劑盒說明書 微量法 技術(shù)文章

更新時間:2019-06-06  |  點擊率:2108
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非蛋白巰基檢測試劑盒

商品貨號:MS1520
英文名稱:Non-protein sulfhydryl group Assay Kit
別名:非蛋白質(zhì)巰基試劑盒 非蛋白質(zhì)巰基測試盒
檢測方法:微量法

 

商品貨號:商品品牌:規(guī)格基本售價選擇規(guī)格
MS1520-100管/48樣索橋生物100管/48樣¥200.00元 

 

  • 產(chǎn)品詳細(xì)介紹
  •  

 

測定意義:

生物體內(nèi)巰基主要包括非蛋白質(zhì)巰基和蛋白質(zhì)巰基。巰基化合物在體內(nèi)具有重要的解毒功能,對生物體的自我調(diào)節(jié)具有非常重要的生理意義。

測定原理:

巰基基團與5,5’-二硫代-雙-硝基苯甲酸(DTNB)反應(yīng),生成黃色化合物,在412nm處有大吸收峰。

 

 

  • 產(chǎn)品說明書

貨號:MS1520                                    規(guī)格:100 管/48 樣

非蛋白巰基測定試劑盒說明書 微量法

注意:正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義:

生物體內(nèi)巰基主要包括非蛋白質(zhì)巰基和蛋白質(zhì)巰基。巰基化合物在體內(nèi)具有重要的解毒功 能,對生物體的自我調(diào)節(jié)具有非常重要的生理意義。

測定原理:

巰基基團與 5,5’-二硫代-雙-硝基苯甲酸(DTNB)反應(yīng),生成黃色化合物,在 412nm 處 有大吸收峰。 自備實驗用品及儀器: 天平、研缽、恒溫水浴鍋、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板和甲醇。

試劑組成和配制:

提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑一:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑二:液體 1 mL×1 管,4℃避光保存。

樣品的制備:

1. 動物、植物組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液)進行冰浴勻漿,然后加入 4mL 甲醇,室溫震蕩 10min,然后 10000g, 4℃離心 10min,取上清置冰上待測。

2. 細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細(xì) 胞加入 1mL 提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時間 3min) 然后 10000g,4℃離心 10min,取上清置冰上待測。

3. 血清、培養(yǎng)液:取 0.1mL,加 0.4mL 甲醇,室溫震蕩 10min,然后 10000g,4℃離心 10min, 取上清置冰上待測。

操作步驟:

1、分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min,調(diào)節(jié)波長至 412nm,蒸餾水調(diào)零。

2、操作表

                     對照管              測定管

樣品(μ L)              40                 40 

試劑一(μ L)            150                 150

試劑二(μ L)                               10

H2O(μ L)              10 

 

計算公式:

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 1.7236 x,R 2 = 0.9994

1. 組織:

非蛋白質(zhì)巰基含量(μ mol/g 鮮重)= 1.7236 /A ×V 反總÷ (V 樣÷V 樣總×W) ×5=14.5×Δ A÷ W

2. 血清、培養(yǎng)液:

非蛋白質(zhì)巰基巰基含量(μ mol/mL)= 1.7236 /A ×V 反總÷V 樣×5=14.5×Δ A

3. 細(xì)胞:

非蛋白質(zhì)巰基含量(μ mol/10^4)= 1.7236 /A ×V 反總÷ (V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量) ×5 =14.5×Δ A÷細(xì)胞數(shù)量

V 反總:反應(yīng)總體積,0.2mL;V 樣:反應(yīng)中樣品體積,0.04mL;V 樣總:加入提取液體積,1mL; W:樣品質(zhì)量,g ;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;

注意事項: 低檢出限為 10μ mol/L。

 

b.用 96 孔板測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 0.8618x,R 2 = 0.9994

1. 組織:

非蛋白質(zhì)巰基含量(μ mol/g 鮮重)= 0.8618 /A ×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)×5= 29×Δ A÷W

2. 血清、培養(yǎng)液:

非蛋白質(zhì)基含量(μ mol/L)= 0.8618/A ×V 反總÷V 樣×5=29×Δ A

3. 細(xì)胞:

非蛋白質(zhì)巰基含量(μ mol/10^4)= 0.8618 /A ×V 反總÷ (V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量) ×5 =29×Δ A÷細(xì)胞數(shù)量

V 反總:反應(yīng)總體積,0.2mL;V 樣:反應(yīng)中樣品體積,0.04mL;V 樣總:加入提取液體積,1mL; W:樣品質(zhì)量,g ;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;

 

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