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丙酮酸脫羧酶(PDC)測試盒 微量酶標儀法 說明 技術 文章

更新時間:2019-06-04  |  點擊率:2313

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丙酮酸脫羧酶(PDC)活性檢測試劑盒

商品貨號:MS1006
英文名稱:Micro Pyruvate Decarboxylase (PDC) Assay Kit
別名:丙酮酸脫羧酶試劑盒 PDC Kit 丙酮酸脫羧酶(PDC)試劑盒 丙酮酸脫羧酶(PDC)測試盒
檢測方法:微量法

 

商品貨號:商品品牌:規(guī)格基本售價選擇規(guī)格
MS1006 -100管/96樣索橋生物100管/96樣¥1400.00元 

測定意義:

PDC主要存在于酵母中,是乙醇發(fā)酵的關鍵酶之一,催化丙酮酸脫羧生成乙醛。

測定原理:

PDC催化丙酮酸脫羧生成乙醛,添加乙醇脫氫酶(ADH)來進一步催化NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+;NADH在340nm有吸收峰,而NAD+沒有;通過測定340nm光吸收下降速率,來計算PDC活性。

 

貨號:MS1006                                                    規(guī)格:100管/96樣

丙酮酸脫羧酶(PDC)活性測定試劑盒說明書

微量法

注意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義:

PDC主要存在于酵母中,是乙醇發(fā)酵的關鍵酶之一,催化丙酮酸脫羧生成乙醛。

測定原理:

PDC催化丙酮酸脫羧生成乙醛,添加乙醇脫氫酶(ADH)來進一步催化NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+;NADH在340nm有吸收峰,而NAD+沒有;通過測定340nm光吸收下降速率,來計算PDC活性。

自備實驗用品及儀器:

研缽、冰、臺式離心機、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、可調式移液槍和蒸餾水。

試劑組成和配制:

試劑一:液體×1 瓶,4℃保存。

試劑二:液體×1 瓶,4℃保存。

試劑三:液體×1 瓶,4℃保存。

試劑四:液體×1 瓶,﹣20℃保存。

混合試劑:臨用前配制,小心把試劑四轉移到試劑三中,充分溶解。

試劑六:液體×1 管,4℃保存。

粗酶液提?。?/span>

1、細菌或細胞處理:收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照每200萬細菌或細胞加入400μL提取液,超聲波破碎細菌或細胞(功率200W,工作3s,間歇10s,工作35次),16000g 4℃離心20min,取上清,置冰上待測。

2、組織處理:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿,16000g 4℃離心20min,取上清,置冰上待測。

3、血清(漿)樣品:直接檢測。

PDC 測定操作:

1.分光光度計/酶標儀預熱30min,調節(jié)波長到340nm,蒸餾水調零。

2.試劑二置于25℃水浴中預熱30min。

3.空白管:依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL蒸餾水、20μL混合試劑、140μL試劑二和20μL試劑六,迅速混勻后于340nm比色,記錄15s和75s的吸光值,分別記為A1和A2。

4.測定管:依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL上清液、20μL混合試劑、140μL試劑二和20μL試劑六,迅速混勻后于340nm比色,記錄15s和75s的吸光值,分別記為A3和A4。

注意:空白管只需測定一次。

PDC 活性計算:

a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下

(1)按照蛋白濃度計算

活性單位定義:25℃中,每毫克蛋白每分鐘催化1μmolNADH 氧化為1個酶活單位。

PDC (μmol/min/mg prot) ={[(A3-A4)-(A1-A2)]÷ε÷d×V 總×106}÷(Cpr×V樣)÷T

=1.61×[(A3-A4)-(A1-A2)]÷Cpr

(2)按照樣本質量計算

活性單位定義:25℃中,每克組織每分鐘催化 1μmol NADH 氧化為 1 個酶活單位。

PDC(μmol/min/g) ={[(A3-A4)-(A1-A2)]÷ε÷d×V 總×106}÷(W×V樣÷V樣總) ÷T

=1.61×[(A3-A4)-(A1-A2)]÷W

(3)按細胞數(shù)量計算

活性單位定義:25℃中,每104個細胞每分鐘催化1μmol NADH 氧化為1個酶活單位。

PDC (μmol/min/104cell) ={[(A3-A4)-(A1-A2)]÷ε÷d×V 總×106}÷(細胞數(shù)量×V 樣÷V 樣總)÷T=1.61×[(A3-A4)-(A1-A2)]÷細胞數(shù)量

(4)按血清(漿)體積計算

活性單位定義:25℃中,每毫升血清(漿)每分鐘催化1μmol NADH氧化為1個酶活單位。

PDC (μmol/min/mL) ={[(A3-A4)-(A1-A2)]÷ε÷d×V 總×106}÷V 樣÷÷T

=1.61×[(A3-A4)-(A1-A2)]

ε:NADH 摩爾消光系數(shù),6.22×103 L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V 總:反應體系總體積,0.2mL=2×10-4 L,V 樣:加入反應體系中上清液體積,0.02mL;V 樣總:提取液體積,1 mL;Cpr:蛋白濃度(mg/mL),需要另外測定,建議使用本公司 BCA 蛋白質含量試劑盒;W :樣品質量; T:反應時間,1 min。

b.使用96孔板測定的計算公式如下

(1)按照蛋白濃度計算

活性單位定義:25℃中,每毫克蛋白每分鐘催化1μmol NADH氧化為1個酶活單位。

PDC (μmol/min/mg prot) ={[(A3-A4)-(A1-A2)]÷ε÷d×V 總×106}÷(Cpr×V 樣) ÷T=3.22×[(A3-A4)-(A1-A2)]÷Cpr

(2)按照樣本質量計算

活性單位定義:25℃中,每克組織每分鐘催化 1μmol NADH 氧化為1個酶活單位。

PDC (μmol/min/g) ={[(A3-A4)-(A1-A2)]÷ε÷d×V 總×106}÷(W×V 樣÷V 樣總) ÷T=3.22×[(A3-A4)-(A1-A2)]÷W

(3)按細胞數(shù)量計算

活性單位定義:25℃中,每104個細胞每分鐘催化1μmol NADH氧化為1個酶活單位。

PDC (μmol/min/104cell) ={[(A3-A4)-(A1-A2)]÷ε÷d×V 總×106}÷(細胞數(shù)量×V 樣÷V 樣總)÷T=3.22×[(A3-A4)-(A1-A2)]÷細胞數(shù)量

(4)按血清(漿)體積計算

活性單位定義:25℃中,每毫升血清(漿)每分鐘催化1μmol NADH 氧化為1個酶活單位。

PDC (μmol/min/mL) ={[(A3-A4)-(A1-A2)]÷ε÷d×V 總×106}÷V 樣÷÷T

=3.22×[(A3-A4)-(A1-A2)]

ε:NADH 摩爾消光系數(shù),6.22×103L/mol/cm;d:96孔板光徑,0.5 cm;V 總:反應體系總體積,0.2mL=2×10 -4 L,V 樣:加入反應體系中上清液體積,0.02mL;V 樣總:提取液體積,1 mL;Cpr:蛋白濃度(mg/mL),需要另外測定,建議使用本公司BCA蛋白質含量試劑盒;W :樣品質量; T:反應時間,1min。

注意事項:配制好的混合液3天內使用完。

 

輔酶Ⅰ系列    
QS1000輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒可見分光光度法50管/24樣500
MS1000輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒微量法100管/48樣920
QS1001乳酸脫氫酶(LDH)測試盒可見分光光度法50管/24樣170
MS1001乳酸脫氫酶(LDH)測試盒微量法100管/48樣330
QS1002NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)測試盒紫外分光光度法50管/48樣280
MS1002NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)測試盒微量法100管/96樣550
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MS1003NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)測試盒微量法100管/96樣600
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MS1006丙酮酸脫羧酶(PDC)測試盒微量法100管/96樣1400
QS1007醇脫氫酶(ADH)測試盒紫外分光光度法50管/48樣280
MS1007醇脫氫酶(ADH)測試盒微量法100管/96樣550
QS1008單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測試盒紫外分光光度法50管/48樣800
MS1008單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測試盒微量法100管/96樣1550
QS1009乙醛脫氫酶(ALDH)測試盒紫外分光光度法50管/48樣420
MS1009乙醛脫氫酶(ALDH)測試盒微量法100管/96樣800
QS1010NAD激酶(NADK)測試盒可見分光光度法50管/48樣600
MS1010NAD激酶(NADK)測試盒微量法100管/48樣1100
QS1011線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測試盒   紫外分光光度法25管/24樣1280
MS1011線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測試盒   微量法100管/96樣2500

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