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乳酸脫氫酶(LDH)測試盒 微量酶標儀法 說明 技術 文章

更新時間:2019-03-29  |  點擊率:3185
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乳酸脫氫酶(Lactate Dehydrogenase,LDH)活性檢測試劑盒

商品貨號:MS1001
英文名稱:Micro Lacate Dehydrogenase(LDH)Assay Kit
別名:乳酸脫氫酶試劑盒 LDH Kit 乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒 乳酸脫氫酶(LDH)測試盒
檢測方法:微量法

 

商品貨號:商品品牌:規(guī)格基本售價選擇規(guī)格
MS1001-100管/48樣索橋生物100管/48樣¥330.00元 

 

  • 產品詳細介紹
  •  
  • 產品說明書

 

測定意義:

LDH(EC 1.1.1.27)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,是糖酵解途徑的末端酶,催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應,伴隨著NAD+/NADH之間互變。

測定原理:

LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸進一步與2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在堿性溶液中顯棕紅色,顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。

貨號:MS1001                                                     規(guī)格:100管/48樣

乳酸脫氫酶(Lactate Dehydrogenase,LDH)試劑盒說明書

微量法

正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義:

LDH(EC 1.1.1.27)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,是糖酵解途徑的末端酶,催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應,伴隨著NAD+/NADH之間互變。

測定原理:

LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸進一步與2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在堿性溶液中顯棕紅色,顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。

自備實驗用品及儀器:

可見分光光度計/酶標儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

提取液:60mL×1瓶, 4℃保存;

試劑一:液體5mL×1瓶, 4℃保存;

試劑二:粉劑×1支,-20℃保存,用時加入1.3 mL蒸餾水充分溶解備用,用不完的試劑

        分裝后-20℃保存,禁止反復凍融;

試劑三:液體5 mL×1瓶,4℃避光保存;

試劑四:液體20mL×1瓶,4℃保存;

樣品測定的準備:

1、細菌、細胞或組織樣品的制備:

細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為1000~5000:1的比例(建議2000萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

2、血清(漿)樣品:直接檢測。

測定步驟:

  1. 分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節(jié)波長至450nm,蒸餾水調零。

2、樣本測定(在EP管中加入下列試劑)

試劑名稱(μL)

測定管

對照管

樣本

10

10

試劑一

50

50

試劑二

10

 

蒸餾水

 

10

充分混勻,37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)準確水浴15min

試劑三

50

50

充分混勻,37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)準確水浴15min

試劑四

150

150

充分混勻,室溫靜置15min, 450 nm下測定吸光度,計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管需要設一個對照管。

LDH活力單位的計算:

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、標準條件下測定的回歸曲線, y = 0.725x   (x為標準品濃度,μmol/mL;y為對吸光度)。

2、血清(漿)LDH活力的計算

單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘催化產生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。

LDH(nmol/min/mL)=ΔA÷0.725÷T×103=92×ΔA

3、細胞、細菌和組織中LDH活力的計算

(1)按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產生1 nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。

LDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA÷0.725×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103 =92×ΔA÷Cpr

需要另外測定,建議使用本公司BCA蛋白質含量測定試劑盒。

(2) 按樣本鮮重計算:

單位的定義:每g組織每分鐘催化產生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。

LDH(nmol/min/g鮮重)=[ΔA÷0.725×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103 =92×ΔA÷W

(3)按細菌或細胞密度計算:

單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。

LDH(nmol/min/104 cell)= [ΔA÷0.725×V1]÷(2000×V1÷V2)÷T×103 =0.046×ΔA

V1:加入反應體系中樣本體積,0.01mL;V2:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,15 min;Cpr:蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;2000:細胞或細菌總數,2000萬;103:1umol/mL=103 nmol/mL。

b.使用96孔板測定的計算公式如下:

1、標準條件下測定的回歸曲線, y = 0.3625x   (x為標準品濃度,μmol/mL;y為對吸光度)。

2、血清(漿)LDH活力的計算

單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘催化產生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。

LDH(nmol/min/mL)=ΔA÷0.3625÷T×103=184×ΔA

3、細胞、細菌和組織中LDH活力的計算

(1)按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產生1 nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。

LDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA÷0.3625×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103 =184×ΔA÷Cpr

需要另外測定,建議使用本公司BCA蛋白質含量測定試劑盒。

(2) 按樣本鮮重計算:

單位的定義:每g組織每分鐘催化產生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。

LDH(nmol/min/g鮮重)=[ΔA÷0.3625×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103 =184×ΔA÷W

(3)按細菌或細胞密度計算:

單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。

LDH(nmol/min/104 cell)= [ΔA÷0.3625×V1]÷(2000×V1÷V2)÷T×103 =0.092×ΔA

V1:加入反應體系中樣本體積,0.01mL;V2:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,15 min;Cpr:蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;2000:細胞或細菌總數,2000萬;103:1umol/mL=103 nmol/mL。

 

輔酶Ⅰ系列    
QS1000輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒可見分光光度法50管/24樣500
MS1000輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒微量法100管/48樣920
QS1001乳酸脫氫酶(LDH)測試盒可見分光光度法50管/24樣170
MS1001乳酸脫氫酶(LDH)測試盒微量法100管/48樣330
QS1002NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)測試盒紫外分光光度法50管/48樣280
MS1002NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)測試盒微量法100管/96樣550
QS1003NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)測試盒紫外分光光度法50管/48樣320
MS1003NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)測試盒微量法100管/96樣600
QS1004NADH氧化酶(NOX)測試盒  可見分光光度法50管/48樣450
MS1004NADH氧化酶(NOX)測試盒  微量法100管/96樣850
QS1005-50檸檬酸合酶(CS)測試盒可見分光光度法50管/48樣3200
QS1005-25檸檬酸合酶(CS)測試盒可見分光光度法25管/24樣2000
MS1005檸檬酸合酶(CS)測試盒微量法100管/48樣3500
QS1006丙酮酸脫羧酶(PDC)測試盒紫外分光光度法50管/48樣720
MS1006丙酮酸脫羧酶(PDC)測試盒微量法100管/96樣1400
QS1007醇脫氫酶(ADH)測試盒紫外分光光度法50管/48樣280
MS1007醇脫氫酶(ADH)測試盒微量法100管/96樣550
QS1008單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測試盒紫外分光光度法50管/48樣800
MS1008單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測試盒微量法100管/96樣1550
QS1009乙醛脫氫酶(ALDH)測試盒紫外分光光度法50管/48樣420
MS1009乙醛脫氫酶(ALDH)測試盒微量法100管/96樣800
QS1010NAD激酶(NADK)測試盒可見分光光度法50管/48樣600
MS1010NAD激酶(NADK)測試盒微量法100管/48樣1100
QS1011線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測試盒   紫外分光光度法25管/24樣1280
MS1011線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測試盒   微量法100管/96樣2500